免疫技术与传染病杂志

高致病性禽流感病毒H5N1亚型实时荧光定量聚合酶链式反应（PCR）检测方法的建立

谭妙莲、牛媛媛、水卫、林建聪、李明、张昌然

高致病性禽流感病毒属甲型流感病毒，可引起家禽和人类的严重疾病。本研究旨在建立一种检测高致病性H5N1亚型禽流感病毒的荧光定量RT-PCR方法。根据我国发现的禽流感病毒序列，研制出H5和N1亚型特异性探针对，严格设计2对引物和2个荧光探针，并优化反应体系。根据H5N1毒株提取质粒RNA量，绘制荧光定量PCR标准曲线DWQBGWDWQBGW，对所有样本进行Real-time PCR检测。经鉴定，该方法对高致病性H5N1亚型禽流感病毒具有特异性，灵敏度为102～103拷贝/反应，标准曲线在109～105 DNA拷贝/反应完成。从病毒 RNA 提取到完成检测仅用了三个小时。该检测方法操作简单，重复性高。总之，本文描述的荧光定量 PCR 不仅能快速、特异性和灵敏地检测 H5 基因，还能检测 N1 基因。